把 raw264.7 这头细胞养好，得先别整那些花里胡哨的“体外培养”大词儿，直接把它当成个“活细胞”看待就行。别想着把它塞进那种死气沉沉的培养瓶里，得先送到个像家住似的恒温恒湿的地方，温度管住在 37 度，相对湿度大约 60%，别让它跟空气里的潮气抢资源，也别让它认定干渴。
这套环境配好了，得找个放 5% CO2 的罐子要么培养箱，毕竟 CO2 浓度高了细胞会喘不过来，低了又养不活，这个点得死磕。 细胞进来了之后，别急着扔进盖满培养液的大盆里，得先给它打个基础针。
这时候细胞可能刚被“杀”醒，代谢还处在一种微妙的平衡里，这时候得给点“饭吃”，也就是补上必要的外向因子。
比如加一点生长因子，像 EGF、PDGF 要么 BFGF，这就好比给刚出生的宝宝补钙，缺了这玩意儿，细胞瞬间就长不大，就连直接凋亡。
要是细胞本身长得慢，还得加点胰岛素要么地塞米松，这是为了维持能量供应和抗炎反应。
这时候你的培养液得干净利落，那层“皮”得厚，得把细胞从血清里提纯出来，去除掉那些杂质和细胞因子，不然这些“坏蛋”会扰乱细胞的正常节奏，害得实验数据全是噪音。 一旦这层“皮”厚了，细胞就启动活跃生长了。
这时候就得换观念，从“等着细胞自己长得快”变成“推着细胞往前走”。
这就好比开车，那会儿是看着车速慢慢走，目前得踩油门。
这时候要加血清，一般是用丹诺血清要么汉密尔顿血清，浓度管住在 5% 到 20% 之间，别忒高也别忒低，忒高会毒害细胞，忒低长得就慢。加完血清，就得加一两个生长因子，比如碱性成纤维生长因子（bFGF），浓度大约 10 到 100 ng/mL，这个量得根据细胞系的不同来微调，有些细胞对不生长因子特别敏感，得把浓度调得低一点慢慢来。 这时候你得有个“手感”。
看着细胞从单层变成双层，从聚集成团变成铺展开来，这就是细胞在“呼吸”和“代谢”。
要是看着像发大水似的到处乱窜，说明大家长得忒猛，这时候要加水稀释；要是看着像刚睡醒的婴儿，动也不动，那就要加一两个生长因子，要么把血清浓度调高一点。在这个过程中，你要不断观察细胞的形态，有的细胞长得快，有的慢，有的就连出现“衰老”迹象，这时候得及时调整培养条件，比如增添 CO2，要么调整血清比例，直到它们长得均匀一致。 这时候最考验人的就是耐心和自我质疑。
看着细胞分裂，有时候你会想是不是培养条件不对，有时候你会想是不是细胞系本身有难题。
这时候得学会“看数据讲话”，而不是凭感觉。你能够取一些细胞做 qPCR，测那些特异性的基因，看看它们表达量是不是在上升；你能够取一些细胞做 Western Blot，看看那些蛋白是不是在积累；你能够取一些细胞做 FACS 分选，看看是不是有特定的亚群在疯狂生长。数据是唯一的裁判，它不会骗人，也不会撒谎。 另外，别忘了培养环境的清洁度。培养箱里的空气是细胞的第一水源，要是环境里有细菌或真菌，细胞会立马对着这些细菌开火。
这时候得用那种带滤芯的离心管（3 层滤芯的那种），要么用那种专门用来装细胞的培养箱，并且这些设备得定期消毒，最好是用 10% 的乙醇要么消毒液擦擦，别让它发霉。环境忒差，细胞就算喂得再好，也活不长久。 最终，别忘了记录。
每次换液、加血清、加因子，都要记下来。
这个记录本不只是是为了赶明儿查账，更是为了赶明儿做实验的时候能理清楚脉络。
比如昨天加了 10 ng/mL 的 bFGF，今天加了 100 ng/mL，明天又加了 bFGF，这样你就知道在这个工夫点，细胞的具体状态是怎么着的，撇脱后续分析。 整个过程实际上挺繁琐的，你得像个“细胞厨师”一样，既懂火候，又懂食材，还要看得细致入微。你不可能一天就把 1000 个细胞都养好，你得像养孩子一样，一个细胞一个细胞地观察，一个实验一个实验地调试。当你终于看到那些细胞在培养箱里像一群快乐的舞蹈家一样扭动，看着它们分裂、增殖，你就能感觉到那种成就感。
这时候再回头看那些冰冷的数据曲线，也就没那么可怕了。


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